在液相色譜分析中，改善峰形與提升分離度是確保分析結果準確性和可靠性的關(guān)鍵步驟。今天小研為大家整理了液相改善峰形與提升分離度相關(guān)的知識，僅供大家參考~
- 對于常規色譜柱，一般先用90%的乙腈（或甲醇）/水（或緩沖溶液）進(jìn)行試驗，這樣可以快速地得到初步的分離結果。
- 而對于手性色譜柱，在正相模式下可以先用正己烷:異丙醇（或乙醇）=70:30比例進(jìn)行快速分離；在反相模式下可以用90%的乙腈（或甲醇）/水進(jìn)行試驗，得到初步的出峰結果。
- 根據出峰情況，逐步調整有機溶劑（乙腈或甲醇）的比例。每減少10%的有機溶劑量，保留因子約增加3倍，此為三倍規則。
- 低粘度：粘度應低于2cp，高粘度溶劑會(huì )影響溶質(zhì)的擴散、傳質(zhì)，降低柱效，增加柱壓降，延長(cháng)分離時(shí)間。
- 與檢測器兼容：例如，使用UV檢測器時(shí)，流動(dòng)相在檢測波長(cháng)下應無(wú)吸收或吸收很小。
- 純度：流動(dòng)相中的雜質(zhì)可能在色譜柱上積累，影響色譜柱的壽命和分離效果，建議盡量使用色譜純的溶劑對樣品進(jìn)行分析。
- 對樣品的溶解度適宜：如果溶解度不佳，樣品會(huì )在柱頭沉淀，影響分離效果和色譜柱性能。
- 對于弱酸（4≤pKa≤7）或弱堿（7≤pKa≤8）樣品，采用反相離子抑制技術(shù)，通過(guò)調節流動(dòng)相的pH值來(lái)抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，從而改善峰形。
- 流動(dòng)相中加入適量的弱酸、弱堿或緩沖鹽溶液（如醋酸、三乙胺、磷酸鹽緩沖液等），以控制流動(dòng)相的pH值。
- 根據樣品的性質(zhì)和分離要求選擇合適的色譜柱類(lèi)型如常規色譜（如C18、C8柱等）和手性色譜柱等，選對色譜柱往往可以實(shí)現事半功倍的效果。
- 適當的流速可以提高分離效率，但過(guò)高的流速可能導致峰形展寬和分離度下降。
- 柱溫對分離效果也有影響，適當提高柱溫可以加快溶質(zhì)在色譜柱中的傳質(zhì)速度，但也可能導致某些組分的熱降解，應當充分考慮樣品的穩定性等因素。
- HPLC所用流動(dòng)相必須預先脫氣，否則容易在系統內逸出氣泡，影響泵的工作、柱的分離效率以及檢測器的靈敏度和基線(xiàn)穩定性。
- 常用的脫氣方法有加熱煮沸、抽真空、超聲、吹氦等。超聲脫氣是一種較為簡(jiǎn)便有效的方法，但需注意避免溶劑瓶與超聲槽底部或壁接觸以防破裂。
- 所有溶劑使用前都必須經(jīng)過(guò)濾以除去雜質(zhì)微粒，即使是色譜純試劑也不例外（除非標簽上標明“已濾過(guò)”）。
- 分清有機相濾膜和水相濾膜的使用范圍，避免濾膜溶解導致溶劑污染。
- 在調整流動(dòng)相比例和pH值時(shí)，應逐步進(jìn)行并注意觀(guān)察峰形和分離度的變化。
- 確保實(shí)驗室環(huán)境整潔、溫度濕度適宜以減少外部因素對實(shí)驗結果的影響。
通過(guò)以上方法和策略的綜合運用，可以顯著(zhù)改善液相色譜分析中的峰形并提升分離度，從而獲得更加準確和可靠的實(shí)驗結果。
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