如何判斷液相色譜儀是否被污染以及攜帶污染類(lèi)型、發(fā)生原因和減少方法

當液相色譜儀被污染之后，就會(huì )出現數據錯誤等問(wèn)題。今天，我們就和大家一起探討一下，如何判斷液相色譜儀是否被污染以及系統 (HPLC) 中“攜帶污染”（或俗稱(chēng)“殘留”）發(fā)生的原因和減少的方法。

柱壓變化影響較小，除非是檢測池太臟，堵塞嚴重，會(huì )對柱壓產(chǎn)生小于1000psi的影響（一般的用到光的檢測池也就耐這么高的壓力），但這種情況不會(huì )持續發(fā)生，給你排查的時(shí)間有限，堵的時(shí)間長(cháng)了，會(huì )爆池，壓力也就沒(méi)有影響了。

峰面積應該是變小。檢測池臟時(shí)會(huì )有兩種情形影響檢測靈敏度。一方面是基線(xiàn)噪聲變大，從整體上影響信噪比。另一方面，檢測池臟了對于光檢測原理的檢測器來(lái)說(shuō)（UV、PDA、DAD、FLD、ELSD）首先會(huì )減弱通過(guò)檢測池的光強度，光強度降低了，靈敏度就會(huì )下降，相當于檢測器光源的能量降低。

許多老式自動(dòng)進(jìn)樣器設計使用低壓進(jìn)樣器，這些進(jìn)樣器需要單獨的清洗瓶，因為它們不需要持續清洗。清洗瓶中應注入流動(dòng)相或溶液，以溶解系統中可能殘留的任何物質(zhì)。如果使用的是現代高壓“直通式 ”自動(dòng)進(jìn)樣器，則很少會(huì )出現攜帶污染問(wèn)題，因為這些現代進(jìn)樣器使用高壓泵將樣品吸入并直接注入流動(dòng)流路，從而減少了對任何清洗階段的需求。

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注：對于多次穿刺的小瓶，必須更換隔膜或使用密封時(shí)間足夠長(cháng)的隔膜材料，以減少這種影響。擦拭隔膜針可消除部分污染。這個(gè)問(wèn)題會(huì )造成兩種污染。(a)當針頭浸入同樣有一個(gè)大隔膜開(kāi)口的樣品瓶（相同或不同的樣品瓶）時(shí)，針頭會(huì )帶著(zhù)一些樣品沉積到新的樣品瓶（或樣品瓶的隔膜上）。(b)污染物還可能順著(zhù)針頭本身流下，在進(jìn)樣時(shí)滴到針座上，造成針座或樣本污染。

減少針頭外部污染的最簡(jiǎn)單的解決方案之一，就是在洗瓶中加入一種溶液，這種溶液經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可以快速將樣品溶解到溶液中。這聽(tīng)起來(lái)很簡(jiǎn)單，但許多色譜分析人員選擇的清洗液根本無(wú)法提高洗針的清潔度。例如肽、蛋白質(zhì)、脂肪、油類(lèi)和/或脂類(lèi)等樣品可能很麻煩，因為它們的溶解性可能與所選的流動(dòng)相不符；流動(dòng)相通常是理想的，但在某些情況下卻不起作用。這些清洗瓶必須經(jīng)常更換（只需在系統中設置多個(gè)清洗瓶位置即可）。此外，每次使用清洗瓶時(shí)都應將瓶蓋關(guān)閉，以減少吸取污染（此步驟至關(guān)重要）。

大多數自動(dòng)進(jìn)樣器閥門(mén)，依靠旋轉密封將樣品從針環(huán)路轉移到系統的流路中。這些閥門(mén)內的部件會(huì )磨損，應至少每6個(gè)月檢查一次，必要時(shí)更換。此外，還應經(jīng)常檢查針座和針是否有磨損或泄漏的跡象。

注：查看進(jìn)樣器是否有泄漏跡象。泄漏總是表明存在問(wèn)題，應立即解決。有泄漏時(shí)不要進(jìn)行進(jìn)樣。您的方法和獲得的數據將無(wú)效。應更換任何磨損的部件并測試系統性能。造成樣品攜帶污染的最常見(jiàn)原因之一是：樣品注入閥旋轉密封磨損。磨損的密封件會(huì )使樣品在兩次進(jìn)樣之間滯留在其空間和凹槽中，導致在隨后的分析中出現樣品色譜峰。此外，緩沖鹽也會(huì )滯留在密封件之間，造成泄漏或攜帶污染。例行的 HPLC 維護以及每天沖洗所有緩沖液/鹽（如適用）可消除這些問(wèn)題。

良好的色譜分析需要全面了解所使用的硬件和HPLC的基本原理。您必須能夠對系統的完整流路和方法開(kāi)發(fā)中使用的色譜概念進(jìn)行故障排除，通過(guò)指導，采用合理的步驟來(lái)學(xué)習。