反相色譜柱的影響因素有哪些？

根據其色譜分離模式，液相色譜柱大致可分為正相、反相、離子交換、疏水、體積排除、親和力和手性。反相色譜柱是以非極性基團載體為填料的色譜柱。

反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合非極性十八烷基官能團(ODS)稱(chēng)為C18柱、其他常用的反相柱還有C8,C4,C2、苯基柱等。還有離子交換柱，GPC柱、聚合物填料柱等。

反相色譜柱的影響因素：

1.柱長(cháng)

隨著(zhù)柱長(cháng)的增加，有機小分子和肽的分辨率增加.但柱長(cháng)的增加并不能顯著(zhù)提高蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率.它們通常在較短的柱子上有很好的分離效果。

2.流動(dòng)相的流速。

有機小分子和肽的分辨率對流動(dòng)相流速非常敏感。蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率不是。流量越小，柱子越長(cháng)，色譜峰的寬度越大，分辨率越小。色譜上樣過(guò)程中的流量對動(dòng)態(tài)吸附容量有很大的影響。

3.溫度。

隨著(zhù)溫度的升高，流動(dòng)相粘度降低，流動(dòng)速度加快，流動(dòng)相與固定相之間的傳質(zhì)速度加快，分辨率增加。同時(shí)，隨著(zhù)溫度的升高，分子熱運動(dòng)增加，疏水效果減弱。提高溫度時(shí)，應考慮目標物質(zhì)的熱穩定性。

4.流動(dòng)相。

流動(dòng)相大，溶質(zhì)分布系數越大，洗脫時(shí)間越短。RPC采用線(xiàn)性梯度洗脫法，降低流動(dòng)相極性（含水量）。水是極性的。zui強溶劑通常與反相色譜中的基本溶劑一起使用。在流動(dòng)相中加入不同濃度的有機溶劑可與水混合，以獲得不同強度的流動(dòng)相。這些有機溶劑被稱(chēng)為修飾劑。反相色譜zui常用的有機溶劑有甲醇和乙腈。此外，乙醇、四氫呋喃、異丙醇和二氧六環(huán)也常被用作修飾劑。有機溶劑的梯度也會(huì )影響分辨率，梯度越小.分辨率越大。