液相色譜柱的使用前需要準備哪些？

　　液相色譜是一類(lèi)分離與分析技術(shù)，其特點(diǎn)是以液體作為流動(dòng)相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術(shù)發(fā)展的過(guò)程中，為了區分各種方法，根據固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。

　　1、使用前認真閱讀色譜柱的說(shuō)明書(shū)，了解色譜柱的種類(lèi)，選用合適的色譜柱。

　　在選用色譜柱時(shí)，應充分考慮所分析樣品的極性大小、化合物的種類(lèi)數量、結構特征。根據化合物的性質(zhì)，選擇合適的色譜柱和分析條件。不同類(lèi)型的色譜柱使用的流動(dòng)相不同，使用錯誤的流動(dòng)相會(huì )降低柱效，損傷柱子。如分析極性較大的多糖類(lèi)成分，應當采用親水性的反相填料。對于首次使用的色譜柱，還應按照廠(chǎng)家的出廠(chǎng)說(shuō)明對色譜柱進(jìn)行低流速的沖洗活化，活化后的色譜填料共價(jià)鍵鍵合力增強，柱效提高，壽命延長(cháng)。

　　2、樣品的準備與預處理

　　我們的經(jīng)驗是樣品純化得越干凈，色譜柱的使用壽命越長(cháng)。許多樣品，尤其是生物樣品，組份非常復雜，對色譜柱的損傷性較大，不經(jīng)預處理的樣品直接分析，會(huì )嚴重縮短色譜柱的使用壽命。因此，在樣品的準備時(shí)需對樣品進(jìn)行預處理，包括準備溶劑的選擇、樣品過(guò)濾等。

　　3、制樣溶劑的選擇

　　制樣溶劑通常需要考慮樣品的溶解性、與流動(dòng)相的相溶性、色譜填料的適用性等方面。這類(lèi)溶劑需對樣品有較大的溶解性，而且與流動(dòng)相溶，洗脫強度最好低于流動(dòng)相或梯度洗脫中的起始流動(dòng)相，以免影響樣品分離。目前許多手性色譜柱都禁止使用DMSO、四氫呋喃、氯仿等溶解樣品，這些溶劑會(huì )破壞固定相的結構，從而縮短色譜柱的使用壽命。此外，制樣溶劑還應與色譜系統其他部件如高壓泵、進(jìn)樣器等相適用。

　　4、制樣溶劑過(guò)濾

　　在進(jìn)樣前需過(guò)濾樣品溶液，如采用0.22μm的微孔濾膜除去不溶性微粒，以免堵塞柱頭濾片及柱內填充床。在條件允許的情況下，最好采用與色譜柱同種填料的固相萃取柱過(guò)濾進(jìn)樣溶液，可以減少在色譜柱上死吸附的物質(zhì)或易堵塞的大分子樣品。如生物樣品中的小極性的油脂類(lèi)易于沉淀死吸附在C18反相色譜柱中，導致柱效降低、柱壓升高。采用SPE柱過(guò)濾后，可以有效減少在色譜柱中附著(zhù)沉積的死吸附成分，保護色譜柱不被污染，保證其使用壽命。

　　5、其他

　　分析物的某些性質(zhì)同樣能影響色譜柱的使用壽命。強酸、強堿性物質(zhì)和蛋白質(zhì)類(lèi)生物大分子，它們能與固定相填料作用，或生成不可逆吸附層，改變填料表面特征，使色譜柱性能發(fā)生變化，最終導致分離失效。此外樣品的進(jìn)樣量過(guò)大、超載都會(huì )影響色譜柱的分離性能和使用壽命。