手性柱常遇到的問(wèn)題有哪些？

　　手性柱常遇到的問(wèn)題有哪些？手性色譜柱通過(guò)影響包埋復合物的形成，特殊位點(diǎn)與分析物的鍵合等而改變手性分離結果。由于這種作用力較微弱，因此需要仔細調節、優(yōu)化流動(dòng)相和溫度以達到最佳分離效果。

　　1、網(wǎng)上對柱子是否可以反沖一直有爭論，那什么樣的柱子可以反沖，什么不可以?反沖后是正著(zhù)用，還是反著(zhù)用?具體到各型號柱子不僅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、離子交換柱等，最好都有解釋。

　　答：一般的正相、反相柱應該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對稱(chēng)的柱子不能反沖，不過(guò)目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見(jiàn)了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著(zhù)用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是：正向使用、反向沖洗。

　　2、我在做方法開(kāi)發(fā)的時(shí)候，用乙腈和水作為流動(dòng)相，在調整梯度的時(shí)候發(fā)現，剛開(kāi)始用60%乙腈，RT為2.5分鐘，調到40%乙腈，RT沒(méi)有變化，30%也沒(méi)有變化，一直調到20%的時(shí)候，RT突然變到了約13分鐘，請問(wèn)這是什么原因?我用的是離子交換柱。

　　答：離子交換柱的保留時(shí)間主要由洗脫液的離子強度和pH決定，你現在講的比較簡(jiǎn)單，需要把你的方法說(shuō)的詳細一點(diǎn)才能做具體的分析。譬如分析物是什么情況，其含有極性電離基團和非極性基團是什么性質(zhì)?離子交換柱是聚合物基質(zhì)還是硅膠基質(zhì)?水相是什么緩沖鹽?對于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的時(shí)候應該怎樣進(jìn)行活化及維護?為什么要這樣做?

　　3、對于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的時(shí)候應該怎樣進(jìn)行活化及維護?為什么要這樣做?

　　答：新柱活化，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過(guò)程，除了用流動(dòng)相平衡外，有時(shí)候還必須用所測樣品對新柱進(jìn)行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽尤其重要。因為分子量高的物質(zhì)分子，擴散速度慢，平衡所需時(shí)間也相應較長(cháng)。具體平衡方式也很簡(jiǎn)單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時(shí)間穩定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測定。如果要加快平衡時(shí)間，把前面用來(lái)平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續進(jìn)樣多針。用待測物對新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。

　　4、測定多肽，一般采用什么柱子?流動(dòng)相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類(lèi)似三肽的短肽，應該怎么選擇柱子?

　　答：分子量不高的多肽一般選用常規C18柱就能測定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。

　　5、氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí)，很傷柱子，如使用一段時(shí)間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復?

　　答：氨基柱測酸性樣品，應該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會(huì )使略帶負電荷的氨基官能團質(zhì)子化，導致使用一段時(shí)間后對于某些類(lèi)的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現在柱效下降。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨)，之后再進(jìn)行分析這類(lèi)酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1%。

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