分析一下液相色譜柱常見(jiàn)故障及解決方法

　　液相色譜柱作為一種高精密儀器，如果在使用過(guò)程中不按照正確方式操作的話(huà)，就容易導致一些棘手的小問(wèn)題。其中常見(jiàn)的就是柱壓?jiǎn)?wèn)題、漂移問(wèn)題、峰型異常問(wèn)題，今天和大家一起分析一下液相色譜柱常見(jiàn)故障及解決方法。

　　【液相色譜柱系統】液相色譜柱主要由貯液瓶、泵、進(jìn)樣器、柱子、柱溫箱、檢測器、數據處理系統組成。對于整個(gè)系統而言，柱子、泵和檢測器是核心部件同時(shí)也是易出問(wèn)題的主要部位。

　　常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法

　　一、柱壓?jiǎn)?wèn)題

　　柱壓?jiǎn)?wèn)題是使用液相色譜過(guò)程中需要密切注意的地方，柱壓的穩定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時(shí)間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩定并不是指壓力值穩定于一個(gè)恒定值而是指壓力波動(dòng)范圍在345kPa以?xún)然蛟?0PSI之間(在使用梯度洗脫時(shí)，柱壓平穩緩慢的變化是允許的)。壓力過(guò)高、過(guò)低都屬于柱壓?jiǎn)?wèn)題。

　　1壓力過(guò)高這是液相在使用中常見(jiàn)的問(wèn)題，指的是壓力突然升高，

　　1、一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時(shí)，我們應該分段進(jìn)行檢查。

　　(1).首先斷開(kāi)真空泵的入口處，此時(shí)PEEK管里充滿(mǎn)液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過(guò)濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個(gè)小時(shí)，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過(guò)濾頭正常，在檢查；

　　(2).打開(kāi)Purge閥，使流動(dòng)相不經(jīng)過(guò)柱子，如果壓力沒(méi)有明顯下降，則是過(guò)濾白頭堵塞。處理方法：將過(guò)濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個(gè)小時(shí)。如果壓力降至100PSI以下，過(guò)濾白頭正常，在檢查；

　　(3).把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質(zhì)導致堵塞，則要用比現在流動(dòng)相更強的流動(dòng)相沖至壓力正常。假如按上面的方法長(cháng)時(shí)間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用流動(dòng)相沖洗柱子。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。問(wèn)題無(wú)法解決可考慮更換色譜柱。

　　2、流速設定不正確：可重新設定正確流量。

　　3、流動(dòng)相配比不正確：不同配比的流動(dòng)相其黏度系數不相同，較高黏度的流動(dòng)相相應的系統壓力也大，如果可能可更換黏度較小的溶劑或重新設定配比。4、系統壓力零點(diǎn)漂移：調節壓力傳感器的零點(diǎn)。

　　2壓力過(guò)低

　　1、一般是由于系統泄漏，處理方法：尋找各個(gè)接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。拆下柱子加適當力擰緊或襯四氟薄膜。

　　2、泵里進(jìn)了空氣，但此時(shí)表現的往往是壓力不穩，忽高忽低，更嚴重一點(diǎn)會(huì )導致泵無(wú)法吸上液體。處理方法：打開(kāi)Purge閥，用3~5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用專(zhuān)用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

　　3、無(wú)流動(dòng)相流出：檢查儲液瓶中有無(wú)流動(dòng)相，沉子是否浸在流動(dòng)相中，泵是否運行。

　　4、參比閥未關(guān)閉：將流速降低后關(guān)閉參比閥。一般降至0.1～0.2mL/min后關(guān)閉參比閥。

　　基線(xiàn)問(wèn)題

　　1基線(xiàn)漂移基線(xiàn)漂移是色譜工作者普遍遇到的問(wèn)題,在實(shí)際工作中,我們經(jīng)常能遇到基線(xiàn)漂移的情況,特別是在梯度洗脫的時(shí)候,基線(xiàn)漂移是常有的事。一般說(shuō)來(lái)，機器剛起動(dòng)時(shí)，基線(xiàn)容易漂移，大概要30min的平衡時(shí)間，如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長(cháng)下(220nm)平衡時(shí)間相對會(huì )比較長(cháng)，但如果你在實(shí)驗過(guò)程中發(fā)現基線(xiàn)漂移，則你要考慮下面的原因：

　　1、柱溫波動(dòng)控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開(kāi)的窗戶(hù)或空調對著(zhù)柱溫箱。

　　2、(即使是很小的溫度變化都會(huì )引起基線(xiàn)的波動(dòng)。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類(lèi)檢測器。)控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器。

　　3、流通池被污染或有氣體用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(應該斷開(kāi)柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。

　　4、紫外燈能量不足更換新的紫外燈

　　5、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑。

　　2基線(xiàn)噪音

　　對于紫外檢測器,氘燈光源打開(kāi)后要預熱30 min以上,基線(xiàn)才能穩定。噪聲是指與被測物無(wú)關(guān)的檢測器輸出信號的隨機擾動(dòng)變化,分短期噪聲和長(cháng)期噪聲兩種。

　　氘燈用的過(guò)久,接近壽命期時(shí)(氘燈的壽命約1 000 h),會(huì )使基線(xiàn)噪音明顯增加,應及時(shí)更換氘燈。除光源外,流路中的氣泡也會(huì )產(chǎn)生噪音。對于判斷基線(xiàn)噪聲增大是由于光源燈的老化還是來(lái)自流路中的氣泡的問(wèn)題,可將泵關(guān)上,繼續走基線(xiàn),如果噪聲立即停止,基線(xiàn)呈一條直線(xiàn),說(shuō)明基線(xiàn)噪聲來(lái)自流動(dòng)相中的氣泡,應設法排氣；若停泵后仍有噪音出現,應考慮是燈的問(wèn)題。

　　基線(xiàn)噪音(規則的)

　　產(chǎn)生基線(xiàn)噪音的原因有：在流動(dòng)相、檢測器或泵中有空氣；漏液；流動(dòng)相混合不完全；溫度影響(柱溫過(guò)高,檢測器未加熱)；在同一條線(xiàn)上有其他電子設備；泵振動(dòng)。

　　了避免基線(xiàn)噪音,在正式進(jìn)樣之前,需要對流動(dòng)相脫氣；沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣；檢查管路接頭是否松動(dòng)；泵是否漏液；是否有鹽析出和不正常的噪音,如有必要,更換泵密封；用手搖動(dòng)使溶劑混合均勻或使用低粘度的溶劑減少差異或加上熱交換器；有其他電子設備時(shí)斷開(kāi)LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來(lái)自于外部,加以更正；泵振動(dòng)時(shí)在系統中加入脈沖阻尼器。

　　基線(xiàn)噪音(不規則的)

　　(1)漏液：檢查接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封,檢查流通池是否漏液。

　　(2)流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成：檢查流動(dòng)相的組成。

　　(3)流動(dòng)相各溶劑不相溶：選擇互溶的流動(dòng)相。

　　(4)檢測器/記錄儀電子元件的問(wèn)題：斷開(kāi)檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。

　　(5)系統內有氣泡：用強極性溶液清洗系統；檢測器內有氣泡,清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調節器。

　　(6)流通池污染(即使是極少的污染物也會(huì )產(chǎn)生噪音):用硝酸清洗流通池；

　　(7)檢測器燈能量時(shí)不足更換燈；

　　(8)色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱。

　　(9)流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常:維修或更換混合器,在流動(dòng)相不走梯度時(shí),不建議使用泵的混合裝置。