使用質(zhì)譜引導怎樣實(shí)現手性化合物純化呢？

　　使用質(zhì)譜引導怎樣實(shí)現手性化合物純化呢？根據FDA的規定1，手性色譜已經(jīng)成為藥物開(kāi)發(fā)早期為通過(guò)藥理學(xué)、毒理學(xué)和臨床信息準確鑒定單一純對映體并進(jìn)行分離的首選工具。

　　超臨界流體色譜（SFC）因其具有更高的效率、更大的通量和更寬的適用性而被證實(shí)成為手性化合物分離的一種主流技術(shù)。手性SFC越來(lái)越受到關(guān)注并且其應用范圍不斷擴大，在一些情況下逐漸成為首選方法。

　　通常情況下，對映體混合物含有一定數量的雜質(zhì)，對于常用的疊加進(jìn)樣和基于信號閾值的收集策略而言（例如UV/PDA檢測），這些雜質(zhì)可降低實(shí)際純化過(guò)程的效率。多數情況下，進(jìn)行一步預凈化是必要的，但因存在資金和工作量限制卻是不實(shí)際的。這需要一種能將對映體與其它雜質(zhì)鑒別開(kāi)來(lái)的多功能檢測方案。除了UV/PDA檢測器之外，3100型質(zhì)譜檢測器是一種可廣泛用于手性分離的理想選擇。

　　在本應用文獻中，展示了質(zhì)譜引導的Prep 100 SFC系統及其在開(kāi)放床式平臺上進(jìn)行疊加進(jìn)樣和收集的功能，并被證實(shí)是一種手性化合物純化的有效工具。下文回顧并描述了用于手性分離案例的系統配置和方法。

　　試驗

　　化學(xué)品

　　CO2由Airgas（Salem，NH，USA）公司提供，并以加壓液體的形式在大約1100–1300 psi的條件下，通過(guò)內置管道供應給質(zhì)譜引導的Prep 100 SFC系統。甲醇和反式芪氧化物（T SO，MW：196）由Sigma-Aldrich（St.Louis,MO,USA）提供。

　　SFC色譜柱

　　ChiralPak AD-H和ChiralCel OD-H（均為21 mm x 250 mm、5μm）由Chiral Technologies公司（West Chester，PA，USA）提供。

　　SFC系統

　　質(zhì)譜引導的Prep 100 SFC系統配備一個(gè)附加的疊加進(jìn)樣器。

　　2767型樣品管理器配置為一個(gè)簡(jiǎn)化型重復餾分收集器。

　　方法條件

　　SFC梯度和流速程序

　　對于所述的全部數據而言，100 g/分鐘的最大總流速與各種等度的改性劑程序配合使用。

　　質(zhì)譜檢測器的條件

　　用于各種試驗的3100型質(zhì)譜檢測器標準ESI模式使用以下關(guān)鍵參數：

　　毛細管電壓：3.5 KV

　　錐孔電壓：40.0 V

　　二級錐孔電壓：3.0 V

　　射頻透鏡電壓：0.1 V

　　源溫度：150?C

　　脫溶劑氣溫度：350?C

　　脫溶劑氣體流速：400 L/小時(shí)

　　錐孔氣體流速：60 L/小時(shí)

　　0.1%的甲酸-甲醇溶液用作補償液流進(jìn)入質(zhì)譜，以提高電離效率。

　　數據管理

　　MassLynx/FractionLynx，第4.1版

　　結果和討論

　　疊加進(jìn)樣模式下的純化放大

　　手性分離中通用的最佳做法是利用疊加進(jìn)樣模式進(jìn)行樣品進(jìn)樣和餾分收集，這可實(shí)現效率最大化并降低生產(chǎn)成本。

　　在含有一定雜質(zhì)的復雜體系中，質(zhì)譜引導的系統可以鑒定和選擇性的收集感興趣的目標化合物，并正確的忽略不需要雜質(zhì)。因而，該系統對于手性化合物的SFC純化，具有高效、適用范圍廣的特點(diǎn)，并成為手性藥物開(kāi)發(fā)的常規主流工具。

　　我們對質(zhì)譜引導的Prep100 SFC系統進(jìn)行了一定的改造，以便將該系統用于手性化合物分離純化時(shí)達到其最大效益，其中包括添加了一個(gè)專(zhuān)用進(jìn)樣器并改變了收集床布局以容納更大的容器，從而可重復收集對映體的餾分。