微生物菌種如何分離純化？

　　【方法】從成都熱電廠(chǎng)采集土樣中分離得到一株微生物菌種,分析該菌株的形態(tài)學(xué)特征、培養特征及16S rDNA序列,確定菌株的分類(lèi)地位。利用Design-Expert軟件中的Box-Behnken法設計實(shí)驗,通過(guò)響應面分析對初始pH值、溫度、接種量和裝液量4個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化,確定其最適培養條件。

　　【結果】獲得菌株Z1,該菌為革蘭氏陰性菌,短桿狀,經(jīng)16S rDNA鑒定為嗜酸性氧化亞鐵硫桿菌(Acidithiobacillus ferrooxidans,簡(jiǎn)稱(chēng)At.f)。確定菌株zui適培養條件為:pH 1.8、溫度30°C、接種量14%、裝液量250 mL搖瓶裝60 mL培養液。在此條件下,Z1的亞鐵氧化率可達99.7%。

　　【結論】Z1菌株適合于生物浸礦的應用。

　　1947年,Colmer和Hinkle從礦山酸性廢水中分離出一株嗜酸桿菌命名為氧化亞鐵硫桿菌(Thiobacillus ferrooxidans,簡(jiǎn)稱(chēng)T.f),并證明該菌能促進(jìn)煤中黃天礦的氧化和溶解,這被認為是微生物冶金研究的開(kāi)端。

　　T.f屬于革蘭氏陰性菌,具有專(zhuān)性好氧、嗜酸、化能自養等特點(diǎn),該菌通過(guò)氧化亞鐵離子為三價(jià)鐵離子或氧化還原態(tài)硫化物為硫酸根而獲得生長(cháng)和生命活動(dòng)的能量,在生物脫硫、生物冶金、生物處理污泥中的重金屬和有色金屬回收等領(lǐng)域都具有一定的應用價(jià)值。隨著(zhù)生物技術(shù)的快速發(fā)展,微生物的鑒定手段被大大豐富,尤其是分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,使微生物的分類(lèi)和鑒定結果更為快捷、準確。

　　Peng H.從不同的礦井水中分離出4株不同的氧化亞鐵硫桿菌,應用16S rDNA序列分析法進(jìn)行了分類(lèi)和鑒定?？蒲腥藛T用單因素或正交實(shí)驗對氧化亞鐵硫桿菌的培養條件進(jìn)行了研究。

　　響應面分析法是分析響應變量η與一組輸入變量(ζ1,ζ2,ζ3...ζk)之間的函數關(guān)系[η=f(ζ1,ζ2,ζ3...ζk)],也是一種實(shí)驗條件尋優(yōu)的方法,微生物菌種適合于解決非線(xiàn)性數據處理的相關(guān)問(wèn)題。與以往的單因素或正交實(shí)驗相比,其優(yōu)點(diǎn)在于不僅能確定單因素對菌株活性的影響,而且能分析各個(gè)因素間交互作用的大小,同時(shí)通過(guò)回歸模型可以分析出影響菌株活性的主要因素。