關(guān)于色譜柱的常見(jiàn)問(wèn)題介紹

　　色譜柱可分為填充柱和開(kāi)管柱兩大類(lèi)。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤(pán)管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件?，F在我們一起來(lái)聊一下關(guān)于色譜柱的常見(jiàn)問(wèn)題吧。

　　1、網(wǎng)上對柱子是否可以反沖一直有爭論，那什么樣的柱子可以反沖，什么不可以。反沖后是正者用，還是反著(zhù)用。具體到各型號柱子不僅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、離子交換柱等最好都有解釋。

　　答：一般的正相反相柱應該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對稱(chēng)的柱子不能反沖，不過(guò)目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見(jiàn)了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著(zhù)用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是：正向使用，反向沖洗。

　　2、我在做方法開(kāi)發(fā)的時(shí)候,用乙腈和水作為流動(dòng)相,在調整梯度的時(shí)候發(fā)現,剛開(kāi)始用60%乙腈,RT為2.5分鐘,調到40%乙腈,RT沒(méi)有變化,30%也沒(méi)有變化,一直調到20%的時(shí)候,RT突然變到了約13分鐘,請問(wèn)這是什么原因?我用的是離子交柱。

　　答：離子交換柱的保留時(shí)間主要由洗脫液的離子強度和pH決定，你現在講的比較簡(jiǎn)單，需要把你的方法說(shuō)的詳細一點(diǎn)才能做具體的分析。譬如分析物是什么情況，其含有極性電離基團和非極性基團是什么性質(zhì)？離子交換柱是聚合物基質(zhì)還是硅膠基質(zhì)？水相是什么緩沖鹽？

　　3、對于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的時(shí)候應該怎樣進(jìn)行活化及維護？為什么要這樣做？

　　答：新柱活化，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過(guò)程，除了用流動(dòng)相平衡外，有時(shí)候還必須用所測樣品對新柱進(jìn)行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其重要。因為分子量高的物質(zhì)分子，擴散速度慢，平衡所需時(shí)間也相應較長(cháng)。具體平衡方式也很簡(jiǎn)單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時(shí)間穩定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測定。

　　如果要加快平衡時(shí)間，把前面用來(lái)平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續進(jìn)樣多針。用待測物對新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。

　　4、測定多肽，一般采用什么柱子？流動(dòng)相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類(lèi)似三肽的短肽，應該怎么選擇柱子？

　　答：分子量不高的多肽一般選用常規C18柱就能測定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。

　　5、氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí)，很傷柱子，如使用一段時(shí)間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復？

　　答：氨基柱測酸性樣品，應該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會(huì )使略帶負電荷的氨基官能團質(zhì)子化，導致使用一段時(shí)間后對于某些類(lèi)的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現在柱效下降。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱（沖洗后當然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨），之后再進(jìn)行分析這類(lèi)酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1％。