前沿 | 破解「阿米卡星未知雜質(zhì)」之謎

繼上一篇《氨基糖苷類(lèi)抗生素-阿米卡星雜質(zhì)穩定性研究分享》之后，今天我們來(lái)分享下阿米卡星的4個(gè)未知降解雜質(zhì)的發(fā)現與研發(fā)過(guò)程。

圖1：客戶(hù)粗品圖（四圖）

（硫酸）阿米卡星是氨基糖苷類(lèi)抗生素，算是一個(gè)比較老的品種了。但是從目前市場(chǎng)反饋看，生產(chǎn)的廠(chǎng)家不在少數。最近我們接到多個(gè)客戶(hù)反饋其阿米卡星產(chǎn)品在長(cháng)期穩定性研究過(guò)程中產(chǎn)生了4個(gè)未知大雜質(zhì)。這些雜質(zhì)保留時(shí)間主要集中在4-10分鐘之間，以相對保留時(shí)間（RRT）計算分別為：0.18~0.2（未知雜質(zhì)1），0.35~0.36（未知雜質(zhì)2），0.37~0.38（未知雜質(zhì)3），0.4~0.42（未知雜質(zhì)4）區間。具體的雜質(zhì)信息數據匯總見(jiàn)圖2：

圖2：四個(gè)未知雜質(zhì)的相關(guān)信息數據匯總

根據已有信息可以判斷以上雜質(zhì)并不是藥典收錄的已知結構雜質(zhì)，但是通過(guò)檢索相關(guān)的文獻和藥典資料，我們發(fā)現以上雜質(zhì)信號在歐洲藥典（EP）典型色譜圖或系統適用性圖譜中均有對應信號出現，但是該雜質(zhì)信號未被歐洲藥典明確鑒定如圖3所示：

圖3：歐洲藥典色譜圖信息（兩圖）

針對歐洲藥典中未充分表征但實(shí)際樣品中出現的雜質(zhì)研究需求，我中心進(jìn)行了專(zhuān)項開(kāi)發(fā)。針對客戶(hù)對阿米卡星未知雜質(zhì)研究的需求，我中心首先依托制備分離部門(mén)對含目標雜質(zhì)的粗品開(kāi)展了制備純化工作。

從粗品圖就可以看到四個(gè)未知雜質(zhì)保留時(shí)間較小并且出峰時(shí)間差異較小，同時(shí)該條件下阿米卡星的檢測條件里面又有非常多的鹽會(huì )對雜質(zhì)的制備產(chǎn)生很大影響。QCS標準物質(zhì)研發(fā)中心制備分離實(shí)驗室投入四個(gè)多月時(shí)間進(jìn)行了制備方法的開(kāi)發(fā)和優(yōu)化，最終實(shí)現了目標雜質(zhì)的良好分離。在整個(gè)開(kāi)發(fā)與生產(chǎn)過(guò)程中主要面臨以下四大難題：

第一：阿米卡星極性過(guò)大，且四個(gè)目標雜質(zhì)保留時(shí)間過(guò)小，需要單獨開(kāi)發(fā)分析和制備方法。

第二：四個(gè)目標雜質(zhì)雜質(zhì)挨得太近，只有接近阿米卡星標準分析方法（100min/針）的分離條件才能有效的分離開(kāi)這四個(gè)雜質(zhì)，所以制備過(guò)程中面臨很大技術(shù)挑戰，最終優(yōu)化后的制備方法所需時(shí)間達到120min/針。

第三：由于目標雜質(zhì)峰分離度較差，所以單針進(jìn)樣量非常小，不到20mg/針，產(chǎn)品的富集周期遠遠超出我們的預期（120min/針，一天八小時(shí)只能進(jìn)4針，單日粗品進(jìn)樣量不到100mg），同時(shí)粗品很難一次性純化干凈，往往需要多次制備。

第四：由于產(chǎn)品分析方法中用了大量的鹽，提純后的產(chǎn)品溶液含有鹽，除鹽也成了一個(gè)非常艱巨的任務(wù)。

最終經(jīng)過(guò)制備同事的不斷努力和辛苦付出，克服以上各種難題，我們終于制備分離得到了四個(gè)未知降解雜質(zhì)樣品。分析同事按照藥典方法分別對四個(gè)雜質(zhì)做了鑒定，并分別完成了阿米卡星API與四個(gè)未知雜質(zhì)的單獨1:1混樣以及四個(gè)未知雜質(zhì)和API的整體混合大混樣?，F分享一下阿米卡星API+未知雜質(zhì)1+未知雜質(zhì)2+未知雜質(zhì)3+未知雜質(zhì)4的總混合進(jìn)樣數據，見(jiàn)圖4：

圖4：四個(gè)未知雜質(zhì)和阿米卡星的混合進(jìn)樣數據

最后，我中心已基本完成了對阿米卡星降解雜質(zhì)的相關(guān)研究，以上未知雜質(zhì)已經(jīng)可以提供相關(guān)產(chǎn)品，歡迎感興趣的客戶(hù)過(guò)來(lái)咨詢(xún)和溝通。

盡管阿米卡星是個(gè)很老的品種了，研究的客戶(hù)不在少數，但目前市場(chǎng)上的客戶(hù)基本上都在反饋阿米卡星雜質(zhì)B和雜質(zhì)G在標準條件下的檢測時(shí)間是反過(guò)來(lái)的，雜質(zhì)B在主峰后面雜質(zhì)G在前面與EP的典型色譜圖或者系統適用性圖譜相悖，很多客戶(hù)質(zhì)疑產(chǎn)品的正確性，但是目前并未檢索到官方勘誤之類(lèi)的資料，下期我們將重點(diǎn)分享阿米卡星EP雜質(zhì)BG的相關(guān)研究，歡迎大家積極參與討論。