高效液相色譜儀(HPLC)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。檢測器是HPLC的關(guān)鍵組成部分之一，它將色譜柱連續流出的樣品組分轉變成易于測量的電信號，被數據系統接收，得到樣品分離的色譜圖。常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。接下來(lái)讓我們詳細介紹一下在液相色譜中六種檢測器的原理及特點(diǎn)。
紫外檢測器是一種應用最廣HPLC檢測器，當檢測波長(cháng)范圍包括可見(jiàn)光時(shí)，又稱(chēng)為紫外-可見(jiàn)檢測器。紫外檢測器的工作原理是朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律。其特點(diǎn)是靈敏度高（檢測下限為10-10g/ml），線(xiàn)性范圍寬，噪聲低，它的最重要特征是對流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感，適用于梯度洗脫，對強吸收物質(zhì)檢測限可達1ng，檢測后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測器串聯(lián)使用。紫外可見(jiàn)檢測器的工作原理與結構同一般分光光度計相似，實(shí)際上就是裝有流動(dòng)相的紫外可見(jiàn)光度計。 圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò )，侵刪因此即使是那些光吸收小、消光系數低的物質(zhì)也可用UV檢測器進(jìn)行微量分析。但它只能檢測有紫外吸收的物質(zhì)，而且流動(dòng)相有一定限制，即流動(dòng)相的截止波長(cháng)應小于檢測波長(cháng)。如果溶劑中含有吸光雜質(zhì)，則會(huì )提高背景噪音，降低靈敏度。此外，梯度洗脫時(shí)或測定波長(cháng)較短時(shí)，基線(xiàn)還會(huì )產(chǎn)生漂移。光電二極管陣列檢測器(PAD)原理與UVD相同，區別在于PAD可檢測到所有波長(cháng)的吸收值，是全掃描光譜圖。PAD的優(yōu)點(diǎn)是可以獲得樣品組分的全部光譜信息。
圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò )，侵刪即，在一次色譜操作中，可同時(shí)獲得吸光值、流出時(shí)間和各組分的紫外-可見(jiàn)光譜圖在一起的三維譜圖，提供既定量又定性的色譜信號。吸收光譜用于組分的定性，色譜峰面積用于定量。使用二極管陣列檢測器，可以對色譜峰進(jìn)行光譜掃描，峰純度鑒定的定性分析，在方法研究中可以快速選擇最佳檢測波長(cháng)，在多組分混合物分析中可以編輯波長(cháng)程序。采用二極管陣列檢測器進(jìn)行論證，也是目前常采用的一個(gè)強有力的手段。它通過(guò)對一個(gè)色譜峰的數點(diǎn)進(jìn)行紫外掃描，然后比較所得到的掃面圖譜的接近程度從而評價(jià)被檢測峰的純度。但是，利用二極管陣列檢測器進(jìn)行峰純度檢查存在兩個(gè)缺點(diǎn)：1、雜質(zhì)濃度低，或與主成分相比吸收太小，達不到檢測靈敏度，無(wú)法檢測出來(lái)。2、當雜質(zhì)的發(fā)色團與主成分一致，或者說(shuō)雜質(zhì)與主組分有相同或幾乎相同的光譜圖且具相近的流出時(shí)間，此時(shí)雜質(zhì)也無(wú)法發(fā)現。熒光檢測器是一種高靈敏的選擇性檢測器，其靈敏度比紫外檢測器高10-1000倍。它適用于檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過(guò)化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，再進(jìn)行熒光檢測。它的原理為有機共軛芳環(huán)分子受紫外光激發(fā)后發(fā)出熒光。
圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò )，侵刪熒光檢測器其靈敏度很高，痕量分析和梯度洗脫樣品的檢測均可采用。其最小檢測濃度可達0.1ng／ml，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個(gè)數量級，但其線(xiàn)性范圍不如紫外檢測器寬。
可用于熒光檢測的物質(zhì)有某些代謝物、食品、藥物、氨基酸、多肽、生物堿和甾族化合物等。由于熒光檢測器的高靈敏度和選擇性，它是體內藥物分析常用的檢測器之一。 但其基線(xiàn)穩定需要平衡的時(shí)間較長(cháng)。
示差折光檢測器的檢測基于被分析物的折光指數的差異，即測量樣品流路與參比流路在折光指數上的差別。當折光指數差異最大時(shí)靈敏度也達到最大。它并不測量絕對的折光指數而是測定折光指數的差別。其典型的應用領(lǐng)域為沒(méi)有紫外吸收、熒光的化合物，例如：碳水化合物、聚合物脂肪酸及油脂類(lèi)等。圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò )，侵刪光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì )產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數不同，就可被檢測，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內檢測器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。示差檢測器為通用檢測器，容易使用。通常來(lái)說(shuō)是比較耐用的檢測器，維護成本低。但其靈敏度低、選擇性差，對流速、溫度及粘度的變化敏感，不能用于梯度洗脫。而且，色譜峰可能是正的，也可能是負的。電化學(xué)檢測器包括極譜、庫侖、安培和電導檢測器等。電導檢測器廣泛用于離子色譜儀中，應用于能電離成離子物質(zhì)的檢測，其響應受溫度影響較大。
安培檢測器應用最廣泛，其靈敏度很高，尤其適合于痕量組分的分析，凡具氧化還原活性的物質(zhì)都能進(jìn)行檢測，如活體透析液中的生物胺，還有酚、羰基化合物、巰基化合物等。本身沒(méi)有氧化還原活性的化合物經(jīng)過(guò)衍生化后，也能進(jìn)行檢測。
電化學(xué)檢測器是根據電化學(xué)原理和物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行檢測。在液相色譜中，它可以檢測出所有電活性物質(zhì)。因此，對部分沒(méi)有紫外吸收或不能發(fā)出熒光但具有電活性的物質(zhì)，可采用電化學(xué)檢測法進(jìn)行檢測。若在分離柱后采用衍生技 術(shù)，還可將它擴展到非電活性物質(zhì)的檢測。
化學(xué)發(fā)光檢測器（Chemiluminescence detector， CD）是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種快速、靈敏的新型檢測器，因其設備簡(jiǎn)單、價(jià)廉、線(xiàn)性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應，生成處于激發(fā)態(tài)勢反應中間體或反應產(chǎn)物，當它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，就發(fā)射出光子。
由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來(lái)自化學(xué)反應，故叫作化學(xué)發(fā)光。當分離組分從色譜柱中洗脫出來(lái)后，立即與適當的化學(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應，導致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強度與該物質(zhì)的濃度成正比。
這種檢測器不需要光源，也不需要復雜的光學(xué)系統，只要有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管將光信號變成電信號，就可進(jìn)行檢測。這種檢測器的最小檢出量可達10-12g。
在化學(xué)史上有許許多多精美絕倫的實(shí)驗，美國的“化學(xué)與工程新知”組織在2003年，邀請全球的眾多化學(xué)家和歷史學(xué)家共同投票選出十大最美麗實(shí)驗，排名第一的是19世紀中葉巴斯德在顯微鏡下手工分離手性酒石酸鹽晶體。蒸發(fā)光檢測器(ELSD)是基于光線(xiàn)通過(guò)微小的粒子會(huì )產(chǎn)生光散射現象的原理。樣品經(jīng)色譜柱分離后會(huì )被氮氣噴為霧狀液滴，云霧狀溶質(zhì)顆粒通過(guò)光路后產(chǎn)生光散射。ELSD要優(yōu)越于RID，靈敏度及檢出限高，對溫度敏感程度低，適用于梯度淋洗。
圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò )，侵刪檢測器是高效液相色譜儀的重要組成部分，不同的檢測器的原理、使用的范圍和對象不同。所以針對不同的檢測器，我們應該注意的重點(diǎn)也不同。只有這樣，才能更好地完成日常的分析檢測工作，提高工作效率。
地址：廣州市黃埔區攬月路3號國際企業(yè)孵化器F座310
電話(huà)：18922204815 
傳真：020-84418344
郵箱：mzzhang@chiral-se.com
