液相色譜中緩沖鹽的正確使用方法

液相方法很多用到緩沖鹽，那么緩沖鹽應該如何正確使用，使用之后應該如何沖洗，如果因使用緩沖鹽出現問(wèn)題時(shí)，應該如何解決？這些問(wèn)題你知道答案嗎？

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在使用緩沖鹽作流動(dòng)相之前，需要用不含緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱，直至基線(xiàn)平穩。原則上，用于沖洗的流動(dòng)相與分析時(shí)所用的流動(dòng)相含水的比例相同(或含水更多)，不同的只是用于沖洗用的流動(dòng)相中不含緩沖鹽。

原因：緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑。用含緩沖鹽的（特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí)）流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí)，如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對較小，不先沖洗掉，接下來(lái)做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中如果有機溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí)，緩沖鹽將會(huì )在色譜柱柱體上析出，沉積下來(lái)，這將可能導致對色譜柱有一定的損害。

用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相(與分析用流動(dòng)相唯一的區別是，用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽)進(jìn)行沖洗約30min，直至基線(xiàn)平穩。如果該色譜柱在接下來(lái)很長(cháng)的一段時(shí)間內不使用，要長(cháng)期保存，則需再加上一步，即用純的有機溶劑沖洗一遍，直至基線(xiàn)平穩。

1、避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對鋼質(zhì)有腐蝕作用

2、緩沖液最好要現配現用，往往緩沖液是良好的菌類(lèi)培養液，隔天或放置長(cháng)時(shí)間實(shí)驗時(shí)會(huì )有很多怪現象發(fā)生。

3、實(shí)驗后不可用有機溶劑直接過(guò)度，有機溶劑會(huì )處使鹽類(lèi)析出，造成液路或色譜柱堵塞，可用95：5的水甲醇沖洗。

4、使用緩沖液要及時(shí)掌握ph范圍。

5、清洗液路和柱子時(shí)，有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗。

6、長(cháng)時(shí)間用緩沖溶液要注意觀(guān)察接頭處有無(wú)析出，若有白色鹽類(lèi)析出，可考慮一定周期用10%硝酸沖洗一下液路(拆下柱子，走30ml,再用5倍水沖洗)可以避免液路的堵塞。

7、選擇緩沖液要用可靠的試劑，避免不純的鹽類(lèi)造成不必要的麻煩。

注：如果流動(dòng)相中有機溶劑的比例很高是不能用來(lái)沖洗緩沖鹽的，是洗不出來(lái)的。例如，通常C18柱先用5%~10%的甲醇沖洗，是可以把緩沖鹽沖洗出來(lái)的，然后用純的有機溶劑來(lái)保護柱子。最好的方法是使用與流動(dòng)相相同濃度不含鹽的流動(dòng)相進(jìn)行清洗。但就是速度慢一些。用水是為了快速替換，一般在15分鐘以?xún)茸詈?，且?.8的流速較好. 如果用純水沖，容易造成鍵合的碳鏈的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液沖?？梢杂眉兯媪鲃?dòng)相中的緩沖液，有機相不變。這樣沖洗柱子比較穩妥。