緩沖液指由一種共軛的質(zhì)子給體和質(zhì)子受體構成的可離子化合物的溶液，在液相色譜使用時(shí)，加入少量酸或堿時(shí)維持溶液pH穩定的作用。
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1.緩沖分析物，使其保持在所需的pH值處。由于在實(shí)際分析工作中，色譜柱上的樣品質(zhì)量非常少，因此僅需要很少的緩沖液就能為樣品提供足夠的緩沖。如果樣品與流動(dòng)相的pH值相差大，且進(jìn)樣量太大，建議在進(jìn)樣前先調節樣品溶液至接近流動(dòng)相pH值。
2.緩沖色譜柱，使其保持恒定的pH值。由于大量的緩沖流動(dòng)相通過(guò)色譜柱，所以固定相不斷暴露在緩沖液中。隨著(zhù)現在商品化的硅膠基質(zhì)色譜柱純度的提高，硅膠上的酸性硅醇基團的含量也越來(lái)越低，因此所需的緩沖液也越來(lái)越少。
緩沖鹽的濃度緩沖鹽的濃度對離子樣品保留值的影響通常較小，濃度一般為10-50mmol/L（但是最好根據具體情況確定）。
主要取決于所需要的緩沖能力，在反向色譜中，流動(dòng)相中水相的pH和離子強度在開(kāi)發(fā)對條件微小變化不敏感的耐用方法中非常重要。對于離子型化合物，典型的樣品的保留隨pH改變而明顯變化。通常在pH2-4的條件下，保留時(shí)間對pH的微小改變穩定性最高。因此建議將這范圍作為大多數樣品方法開(kāi)發(fā)的起始pH，包括堿性化合物和一般的弱酸。緩沖鹽溶液的pH值越接近其pka，緩沖能力越強。一般緩沖鹽溶液的pH值應在其pka±1的范圍內。
如酸性條件下分離堿性化合物，加入NH?CL，堿性物質(zhì)離子與反離子相互作用的平衡導致它們相互的溶劑化并形成相關(guān)復合物離子：[堿]+[Cl]? = [堿+Cl? ]；在低pH時(shí)，堿性化合物被完成質(zhì)子化，溶液陰離子（如CL? ）在流動(dòng)相中破壞了堿性物周?chē)乃肿硬⒃黾悠涫杷?，導致樣品保留時(shí)間增加，當鹽濃度大于50mM時(shí)，保留時(shí)間略有下降，這可能是飽和反離子CI-引起的離子相互作用的屏蔽作用。此外還可以添加硫酸鈉或者高氯酸鈉等改變堿性化合物的保留。
1.緩沖液最好要現配現用，往往緩沖液是良好的菌類(lèi)培養液。2.由于緩沖鹽可能與設備、樣品和或色譜柱發(fā)生作用因此要特別注意，例如磷酸鹽，在含有高濃度有機相（70%以上），可能會(huì )析出；一些緩沖劑放置即降解，貯存或長(cháng)期使用后其紫外吸收會(huì )增加（如：TFA、三乙胺）；一些緩沖鹽能通過(guò)形成離子對，對樣品發(fā)生作用（如三氟醋酸緩沖劑與陽(yáng)離子樣品，三乙胺與陰離子樣品等）。
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