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  • 干貨 | HPLC峰型問(wèn)題之拖尾峰的原因和解決方法

    欄目:行業(yè)資訊 發(fā)布時(shí)間:2023-09-07
    拖尾峰又叫后延峰,拖尾峰表現為前沿陡峭,后沿較前沿平緩的不對稱(chēng)峰。
    峰又叫峰,峰表現為前沿陡峭,后沿較前沿平緩的不對稱(chēng)峰。

    拖尾峰

    拖尾峰原因及解決方法

    拖尾峰主要由柱內填料污染,色譜柱被堵塞,樣品濃度過(guò)高致使柱超載,柱外效應,硅醇基團作用等原因導致。小研邀請了廣州研創(chuàng )的技術(shù)小哥為大家講解一下產(chǎn)生的原因以及解決的方法:



    柱內填料污染

    • 原因:流動(dòng)相和樣品中的雜質(zhì)易造成色譜柱內填料污染,導致拖尾峰出現。
    • 解決方法:
      1.流動(dòng)相所用的各種溶劑至少是分析純,盡量使用色譜純試劑。
      2.流動(dòng)相所用的水最好是超純水或全玻璃器皿雙蒸水。用前先用0.45um溶劑微孔過(guò)濾(器)過(guò)濾,除去可能存在的微粒。
      3.流動(dòng)相建議現用現配,對于含鹽的溶液尤其注意長(cháng)置會(huì )產(chǎn)生細菌或出現沉淀。此外還得保證儲存流動(dòng)相的容器清潔。
      4.復雜樣品可選用0.45um溶劑微孔過(guò)濾(器)或樣品預處理柱對樣品進(jìn)行預處理,確保樣品中不含微粒雜質(zhì)。若樣品不便處理,要使用保護柱。



    色譜柱被堵塞

    • 原因:色譜柱的進(jìn)出口的篩板堵塞,樣品進(jìn)入色譜柱時(shí)會(huì )受阻,液體流動(dòng)受阻形成延遲,使得樣品在相中停留時(shí)間變長(cháng),從而使峰型拖尾。

    • 解決方法:

      1.配置流動(dòng)相時(shí)污染流動(dòng)相使用色譜純溶液,現配現用,并通過(guò)4.5um濾膜過(guò)濾后方可使用。

      2.型號規格插口不匹配,在扭緊的時(shí)候造成形變而促使管道阻塞。色譜柱有物理?yè)p壞是會(huì )造成峰形拖尾。唯一的解決方法就是更換新柱。

      3.樣品存在雜質(zhì),導致堵塞在篩板處,過(guò)濾樣品

      4.應用較高濃的緩存鹽溶液,在關(guān)機時(shí)將會(huì )在出入口端結晶體成塊并導致阻塞。

    5.適當降低溫度,讓試劑溶解得慢一些。

    6.如以上方法都不能解決堵塞問(wèn)題,則需考慮換一根新的手性色譜柱。




    樣品濃度過(guò)高致使柱超載

    • 原因:樣品在柱上超載能引起峰展寬,拖尾(或伸舌)。
    • 解決方法:適當減小進(jìn)樣量或樣品濃度(需要時(shí),可提高檢測器靈敏度)直至峰形和保留時(shí)間不再改變,便可消除這種不良影響。減小進(jìn)樣量還能改善其分離度。正常情況下,樣品中每種化合物在150×4.6mm柱中進(jìn)樣量保持在3~50ug范圍內,不會(huì )引起明顯超載。



    柱外效應

    • 原因:柱外效應(即進(jìn)樣閥、色譜柱及檢測器間的管路過(guò)長(cháng)、直徑過(guò)粗、管路接頭不匹配、有死體積)是指色譜柱之外的造成色譜峰展寬的成因。
    • 解決方法:在可能的條件下,色譜柱要使用合理管長(cháng)的管路,連接管內徑盡可能窄小,切口務(wù)必平整光滑,同時(shí)流速需要合理不要過(guò)快,可采用色譜柱推薦的流速,以防止因樣品擴散造成不能反映色譜柱真實(shí)柱效等情況發(fā)生。



    硅醇基團作用

    • 原因:仔細分析色譜柱內填料表面性質(zhì)可知:反相色譜柱填料的表面大約被鍵合相覆蓋了一半,其余的就是未被鍵合的硅醇基團。所謂的保留是指樣品分子與鍵合相相互作用的結果。但是,酸性或堿性化合物與硅膠表面殘存的硅醇基團或金屬雜質(zhì)之間相互作用而引起雙重保留機理,因此,發(fā)生了峰形拖尾。
    • 解決方法:為了減小峰形拖尾,通??稍诹鲃?dòng)相加入25mM三乙胺(抑制劑)。三乙胺能與硅醇基團發(fā)生強烈的相互作用,從而降低或阻斷樣品分子與硅醇基團的作用,以保證保留機理正常進(jìn)行,并大大緩解了峰形拖尾。建議使用長(cháng)鏈的硅醇基抑制劑,雖起效較慢,但持續力較三乙胺長(cháng)。因為抑制劑分子中除了胺基與硅醇基團發(fā)生極性作用外,大分子中非極性部分與固定相也會(huì )發(fā)生反相作用而產(chǎn)生保留現象。如果將抑制劑加至樣品中,效果會(huì )顯著(zhù)。



    柱內金屬污染

    • 原因:柱內金屬污染(Fe,Ni等)可引起峰形拖尾。金屬可由填料本身帶進(jìn),也可由腐蝕性流動(dòng)相緩慢溶解柱進(jìn)口的金屬濾片,隨流動(dòng)相沉積到柱填料中。
    • 解決方法:若色譜柱內填料被金屬污染后,造成酸/堿性樣品拖尾,可用/酸洗后再鍵合的填料。


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