八大常見(jiàn)液相色譜異常峰解析，必須get

異常的色譜峰指的是色譜圖中的無(wú)峰或出現負峰、寬峰、雙峰、肩峰、峰形不對稱(chēng)等情況。異常峰是色譜實(shí)驗工作中最棘手的問(wèn)題。本文盤(pán)點(diǎn)高效液相色譜峰型最常見(jiàn)的八大異常峰問(wèn)題，希望能幫助各位科技工作者。

一、拖尾峰

1、篩板阻塞：柱子兩頭的過(guò)濾篩板如果堵塞，樣品就會(huì )在篩板部分受阻而形成時(shí)間延遲，使得樣品在柱后流出時(shí)峰型形成拖尾。需要通過(guò)反沖色譜柱，或者更換篩板。

2、色譜柱塌陷：是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對物質(zhì)形成保留，使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動(dòng)相流出，但是又還有一點(diǎn)柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。

3、有污染：即樣品不在同一起跑線(xiàn)起跑，從后面開(kāi)始跑得到達終點(diǎn)稍晚，表現出拖尾。更換色譜柱或者采用有機溶劑梯度洗脫1h以上，以沖洗柱子。

4、流動(dòng)相PH值選擇錯誤：如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動(dòng)態(tài)平衡，離子型的陸續向分子型轉化就會(huì )表現出拖尾。調節PH值可抑制分子解離，改善拖尾，對于堿性化合物，相對較低的PH值更有利于得到對稱(chēng)峰。

二、前沿峰

1、樣品過(guò)載：被保留的樣品在正常出峰時(shí)間前陸續出來(lái)，形成前沿峰。降低樣品含量。

2、樣品溶劑選擇不恰當：當樣品溶劑的洗脫能力大大強于流動(dòng)相時(shí)會(huì )出現前沿峰，例如，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動(dòng)相的洗脫力較弱時(shí)會(huì )出現前沿峰。選擇流動(dòng)相或者接近流動(dòng)相的比例作為樣品溶劑。

3、色譜柱損壞：色譜柱柱效損失，不能對物質(zhì)形成保留。更換色譜柱。

4、在大峰前有小峰出現，假象前沿峰，即大峰前包埋了沒(méi)有分開(kāi)的小峰。調整流動(dòng)相洗脫梯度。

三、倒峰

1、樣品折射率?。?/strong>示差折光檢測器測的信號是折射率，出現倒峰的原因是組分的折射率小于流動(dòng)相。

2、密度的原因：密度不一樣，出來(lái)的峰正倒不一樣。

3、進(jìn)樣所致：進(jìn)樣時(shí)，樣品對原有流動(dòng)相產(chǎn)生瞬間阻斷，然后瞬間涌流，所以產(chǎn)生先倒后高的“溶劑峰”。

4、基本不可避免：試著(zhù)使用與流動(dòng)相相同的溶劑作為溶樣溶劑，另外進(jìn)樣之前注意平衡跟沖洗參比池。倒峰基本上不能避免，但是這樣操作會(huì )小些。

四、包裹

1、色譜柱問(wèn)題：色譜柱流失，柱子被污染。

2、樣品溶解度差：溫度可能會(huì )影響到溶解度。

3、流動(dòng)相不均勻：一般是流動(dòng)相沒(méi)配好，管路流動(dòng)相不均勻，也會(huì )導致上述現象。

五、基線(xiàn)漂移

1、柱溫波動(dòng)：即使是很小的溫度變化都會(huì )引起基線(xiàn)的波動(dòng)，通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類(lèi)檢測器。使用柱溫箱，控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器。

2、流動(dòng)相不均勻：流動(dòng)相條件變化引起的基線(xiàn)漂移大于溫度導致的漂移。使用HPLC級的溶劑，流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣處理。

3、流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。

4、流動(dòng)相配比不當或流速變化：更改配比或流速，為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。

5、樣品中有強保留的物質(zhì)：以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個(gè)逐步升高的基線(xiàn)。使用保護柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中，定期用強溶劑沖洗柱子。

六、出現寬峰

1、色譜柱污染或失效，造成塔板數降低：更換同樣類(lèi)型的色譜柱，如果新柱子可以提供對稱(chēng)的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。

2、柱子與檢測器之間的管路太長(cháng)或管路內徑太大：更換內徑較小的短管路。

3、檢測器對反應時(shí)間或池體積響應過(guò)大：減少響應時(shí)間或使用更小的流通池。

七、基線(xiàn)噪音

1、在流動(dòng)相、檢測器或泵中有空氣(尖銳峰)：流動(dòng)相脫氣，沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣。

2、漏液：檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。

3、流動(dòng)相混合不完全：用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑。

4、溫度影響(柱溫過(guò)高，檢測器未加熱)：使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱交換器。

5、在同一條線(xiàn)上有其他電子設備(偶然噪聲)：斷開(kāi)LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來(lái)自于外部，加以更正。采用精密級穩壓電源。

八、分離度不夠

1、流動(dòng)相梯度洗脫設置不合理：優(yōu)化梯度洗脫程序。

2、流動(dòng)相污染或變質(zhì)(引起保留時(shí)間變化)：重新配置流動(dòng)相。

3、保護柱或分析柱阻塞：去掉保護柱進(jìn)行分析，如果必要則更換保護柱；如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖；如果問(wèn)題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當的再生程序；如果問(wèn)題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。