手性色譜柱的八個(gè)維護方法分享

手性色譜柱的正確使用和維護非常重要。稍有不慎就會(huì )降低柱效，縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中，應注意以下問(wèn)題，以維護手性色譜柱。

1.避免壓力和溫度的急劇變化和任何機械振動(dòng)。溫度的突然變化或色譜柱從高處脫落會(huì )影響柱內的填充狀態(tài)；柱壓的突然升降也會(huì )沖動(dòng)柱內的填料。因此，調節流速時(shí)應緩慢進(jìn)行，閥門(mén)進(jìn)樣時(shí)不宜過(guò)慢旋轉。

2.溶劑的組成應逐漸改變，特別是在反相色譜中，不能直接從有機溶劑改為全水，反之亦然。

3.一般來(lái)說(shuō)，色譜柱不能反沖。只有當生產(chǎn)者指示柱可以反沖時(shí)，才能反沖去除留在柱頭上的雜質(zhì)。否則，反沖會(huì )迅速降低柱效。

4.選擇合適的流動(dòng)相(尤其是流動(dòng)相)pH)，為了避免固定相的損壞。有時(shí)，預柱可以連接到進(jìn)樣器前面。當分析柱與硅膠鍵合時(shí)，預柱為硅膠，使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱前提前被硅膠覆蓋“飽和”避免分析柱中的硅膠基質(zhì)溶解。

5.經(jīng)常用強溶劑沖洗手性色譜柱，去除柱內保留的雜質(zhì)。清洗時(shí)，流路系統中流動(dòng)相的置換應逐漸用混溶溶劑過(guò)渡，每個(gè)流動(dòng)相的體積應為柱體體積的20倍左右。

6.保存色譜柱時(shí)，柱內應充滿(mǎn)乙腈或甲醇，柱接頭應擰緊，防止溶劑揮發(fā)和干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內過(guò)夜或更長(cháng)時(shí)間。

7.在使用手性色譜柱的過(guò)程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片堵塞，應更換濾片或取出清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內，污染柱頭；如果柱效率降低或色譜峰變形，柱頭可能塌陷，死體積增大。在后兩種情況下，小心擰開(kāi)柱接頭，用干凈的小鋼取出柱頭填料1~2mm高度(注意清除污染填料)，然后整平柱內填料。然后用適當的溶劑濕潤固定相(與柱內相同)填充色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。后柱效率提高，但難以恢復到新柱水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前安裝與分析柱固定相同的短柱(5~30mm)，能起到保護、延長(cháng)柱壽命的作用。使用保護柱會(huì )失去一定的柱效，這是值得的。正確使用時(shí)，色譜柱的使用壽命一般可達2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料只能用于硅膠填料pH=在2~9范圍內使用。柱子使用一段時(shí)間后，柱頂可能會(huì )保留一些吸附性強的物質(zhì)，特別是一些有色物質(zhì)更容易看到被吸入柱頂的填料。

8.新色譜柱使用一段時(shí)間后，柱頂填料可能會(huì )塌陷，降低柱效。此時(shí)，還可以添加填料來(lái)恢復柱效。每次工作結束后，最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如，ODS柱子應該用甲醇沖洗到基線(xiàn)平衡。當使用鹽緩沖溶液作為流動(dòng)相時(shí)，使用后應使用無(wú)鹽流動(dòng)相進(jìn)行沖洗。含鹵素元素(氟、氯、溴)的化合物可能會(huì )腐蝕不銹鋼管道，不應長(cháng)期接觸。HPLC儀器上的柱子如不常用，應每4~5天開(kāi)機沖洗15分鐘。