色譜柱什么時(shí)候該換新柱？判斷依據是什么？

色譜工作者經(jīng)常遇到這樣的問(wèn)題。什么時(shí)候換色譜柱？色譜柱的塔板數量能反映色譜柱的狀態(tài)嗎？確定一個(gè)色譜柱應該是“退休”標準，從經(jīng)驗來(lái)看，當色譜柱的塔板數量降低到新柱的百分比時(shí)，就會(huì )覺(jué)得色譜柱不能再使用了？如何判斷你的實(shí)驗室里的色譜柱能不能再使用？判斷依據應該是什么？

我相信每個(gè)色譜工作者都會(huì )關(guān)注分辨率。分辨率是檢查色譜柱分離特定樣品質(zhì)量的水平指標。色譜的核心任務(wù)是使每個(gè)峰完成分離。我們需要在日常工作中獲得合理的峰寬窄峰，以獲得較低的檢測限制（這不再是問(wèn)題，現在色譜柱可以滿(mǎn)足這一要求）。

更好的方法是利用壓力、分辨率和峰值混合指標來(lái)檢查色譜柱的狀態(tài)。測量壓力是最容易的。一般來(lái)說(shuō)，我們確定的色譜方法應滿(mǎn)足以下要求：使用新柱時(shí)，柱壓不應高于2500psi，在任何情況下，壓力都不超過(guò)30000psi。雖然現代液相色譜系統可以在更高的壓力下使用，但由于高壓而產(chǎn)生的系統消耗和泄漏問(wèn)題將非常嚴重。當壓力超過(guò)3萬(wàn)時(shí)psi考慮更換進(jìn)樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑在線(xiàn)濾芯。如果更換濾芯后壓力仍然很高，色譜柱的濾芯或色譜柱就會(huì )被污染，這提醒我們更換柱子。據統計，超過(guò)60%的色譜柱因壓力過(guò)大而損壞。

分辨率是我們調查色譜柱的一個(gè)至關(guān)重要的指標。只要兩種成分能得到基線(xiàn)分離，分析物的定量就不會(huì )有問(wèn)題。對于對稱(chēng)的高斯峰，1.5分辨率即可獲得基線(xiàn)分離；若分辨率為5；Rs在1.7至2.0之間更好。如果峰尾嚴重，則需要更高的分辨率。使用分辨率作為色譜柱評價(jià)指標的優(yōu)點(diǎn)是我們可以直觀(guān)地看到相鄰峰的分離。

調查色譜柱質(zhì)量的另一個(gè)標準是峰形拖尾狀態(tài)。制造商檢測報告的峰形特別漂亮，但這并不意味著(zhù)色譜柱分析了實(shí)際樣品的情況。實(shí)際樣品中總是含有或多或少導致峰形拖尾的成分。最值得一提的是含有氮原子的化合物，它們與硅膠框架上分散的硅羥基緊密結合。色譜柱使用時(shí)間越長(cháng)，鍵合相流失，拖尾越嚴重。然而，拖尾狀態(tài)的變化并不像分辨率的變化那樣立即可見(jiàn)?；诖?，最好設置一個(gè)拖尾因子的上限。例如，美國藥典規定拖尾因子不超過(guò)1.8。

確定色譜柱“拋棄”標準的最佳時(shí)間是當我們開(kāi)發(fā)分析方法或進(jìn)行方法認證時(shí)。一般來(lái)說(shuō)，在開(kāi)發(fā)分析方法的過(guò)程中，你會(huì )測試幾個(gè)色譜柱，分析足夠的實(shí)際樣品，你知道當分離下降時(shí)會(huì )發(fā)生什么。我專(zhuān)注于在開(kāi)始時(shí)使用一個(gè)廣泛的類(lèi)別。我們的經(jīng)驗是：如果您在開(kāi)始時(shí)收緊系統的適用性要求，則很難在方法認證后放寬這一要求。在研究實(shí)際樣品之前進(jìn)行系統適用性調查，以確保色譜符合分析師可接受的標準。