色譜柱“退休”標準的最佳時(shí)間

色譜工作者經(jīng)常會(huì )遇到這樣的問(wèn)題。什么時(shí)候換色譜柱？色譜柱的塔板數量能反映色譜柱的狀態(tài)嗎？確色譜柱應該是“退休”標準，從經(jīng)驗來(lái)看，當色譜柱的塔板數量降低到新柱的百分比時(shí)，可以認為色譜柱不能再使用了？塔板數量是評價(jià)色譜柱質(zhì)量的唯一指標嗎？如何判斷色譜柱不能再使用了？

塔板數量是一個(gè)粗略的指標，不能作為評價(jià)色譜柱的標準。通常使用塔板數量來(lái)檢查色譜系統：將新柱連接到儀器上，并根據色譜柱制造商提供的測試條件對色譜柱進(jìn)行測試。你應該得到和分析報告一樣的結果。最糟糕的是，塔板的數量應該比報告值低10%。如果您測量的塔板數量遠低于制造商提供的報告數據，則表明您的色譜系統可能存在一些問(wèn)題。進(jìn)樣器、柱外效應、毛細連接和易出現問(wèn)題。

利用壓力、分辨率和峰形混合指標來(lái)檢查色譜柱的狀態(tài)

相信每個(gè)色譜工作者都會(huì )關(guān)心分辨率。分辨率是檢查色譜柱分離特定樣品質(zhì)量的指標。然而，另一個(gè)需要考慮的因素是，塔板數量對分辨率的影響只是平方根，這意味著(zhù)當色譜柱的塔板數量減少50%時(shí)，分辨率只減少7%。當色譜柱塔板數量減少到新柱的一半時(shí)，肯定會(huì )出現其他更嚴重的癥狀，表明色譜柱的使用壽命不長(cháng)。在實(shí)際工作中，大多數色譜方法只需要塔板數量的一半，這些色譜方法仍有優(yōu)化的空間?？梢钥闯?，色譜柱的塔板數量并不是分離中最重要的參數。更好的方法是使用壓力、分辨率和峰值混合指標來(lái)檢查色譜柱的狀態(tài)。

（1）壓力測量：壓力測量是最簡(jiǎn)單的，通常確定的色譜方法應滿(mǎn)足以下要求：使用新柱時(shí)柱壓不高于2500psi，在任何情況下，壓力都不超過(guò)30000psi。雖然現代液相色譜系統可以在更高的壓力下使用，但高壓造成的系統損耗和泄漏問(wèn)題將非常嚴重。當壓力超過(guò)3000psi時(shí)，，需要考慮更換進(jìn)樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑的在線(xiàn)濾芯。如果更換濾芯后壓力仍然很高，色譜柱的濾芯或色譜柱就會(huì )被污染，這表明是時(shí)候更換柱子了。據統計，超過(guò)60%的色譜柱損壞是由高壓引起的。

（2）分辨率：分辨率是調查色譜柱的一個(gè)重要指標。只要兩個(gè)組分能得到基線(xiàn)分離，分析物的定量就不會(huì )有問(wèn)題。對于對稱(chēng)的高斯峰，1.5的分辨率可以得到基線(xiàn)分離；若基線(xiàn)分離；Rs在1.7~2.0之間更好。如果峰尾嚴重，則需要更高的分辨率。將分辨率作為色譜柱評價(jià)指標的優(yōu)點(diǎn)是可以直觀(guān)地看到相鄰峰的分離。

（3）峰形拖尾：調查色譜柱質(zhì)量的標準之一是峰形拖尾。制造商測試報告的峰形非常漂亮，但這并不意味著(zhù)色譜柱分析了實(shí)際樣品。實(shí)際樣品中總是或多或少含有峰形拖尾的成分。值得一提的是，含有氮原子的化合物與硅膠骨架上的游離硅羥基緊密結合。色譜柱使用時(shí)間越長(cháng)，鍵合相流失，拖尾越嚴重。但拖尾的變化不能像分辨率的變化那樣立即看到，因此最好設定拖尾因子的上限。例如，美國藥典規定拖尾因子不超過(guò)1.8。

確定色譜柱“退休”標準的最佳時(shí)間是在開(kāi)發(fā)分析方法或進(jìn)行方法認證時(shí)。通常在開(kāi)發(fā)分析方法的過(guò)程中，會(huì )測試幾個(gè)色譜柱，分析足夠的實(shí)際樣品，從而知道分離變差時(shí)是什么樣的情況，一般在開(kāi)始時(shí)傾向于使用廣泛的范圍。根據經(jīng)驗，如果在開(kāi)始時(shí)收緊系統的適用性要求，則很難在方法認證后放寬這一要求。在分析實(shí)際樣品之前，進(jìn)行系統適用性調查，以確保色譜法符合分析師可接受的標準