色譜柱的選擇原則有哪些

在高效液相色譜分析中，色譜柱的選擇直接影響分離效果。選擇合適的色譜柱可以縮短方法開(kāi)發(fā)所需的時(shí)間，使方法更加穩定。

現在有各種各樣的商業(yè)液相色譜柱。根據色譜柱的參數，可以提供初步的選擇，但由于不同儀器制造商的填充技術(shù)和鍵合技術(shù)不同。即使是這樣C18柱，不同品牌.同一品牌的不同系列有不同的功能，能夠耐受性低pH值的.有耐高溫的.適用于堿性樣品等。

要做出適當的選擇，必須對此有一定的認識和理解。

原則一：看物理性質(zhì)

柱長(cháng)，內徑，如250*4.6mm。。一般柱長(cháng)為2-250mm，柱越長(cháng)，分離度越高，但柱壓越高，分離時(shí)間越長(cháng)；然而分離度與理論塔板數的平方根成正比，因此增加柱長(cháng)并不是最有效的分離方法。一般來(lái)說(shuō)，150mm.5um可提供足夠數量的塔板。

粒徑影響色譜分離。粒徑越小，分離越快，柱效應越高，但柱壓力越高，柱容易受到污染，導致柱壽命縮短。常用分析柱通常使用5um填料、復雜的多組分樣品通常用于分離.5um粒徑，較大的內徑制備色譜柱通常使用較大的粒徑。如果固定階段的選擇正確，但分離不夠，那么選擇較小的粒度填充是非常有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍，因此如何選擇填料粒徑需要根據現實(shí)情況而定。

孔徑，60A，100A，120A，300A等待?？讖叫?，孔隙率高，比表面積大，碳負荷高；色譜柱填充孔徑應與分子尺寸相匹配，以確保分子自由進(jìn)出填充孔，并與孔內表面鍵合相分離。通常，孔徑直徑是分子直徑的3倍以上使用80-120A，大分子使用300A。

通常有球形和不規則形狀的顆粒形狀，當使用粘度較大的流動(dòng)相時(shí)，球形顆?？梢越档椭鶋?，延長(cháng)色譜柱的使用壽命。

比表面積，是指每克填料的表面積，如180m2/g—350m2/g，與粒度和孔隙率有關(guān)；如果比表面積較大，則會(huì )增加樣品與鍵合相之間的反應，增加保留率和分離度；如果比表面積小，則可以縮短分析時(shí)間和平衡時(shí)間。如果比表面積大或小，這并不比表面積好。有必要選擇合適的比表面積。

原則二：看化學(xué)性質(zhì)

硅膠基質(zhì):最常見(jiàn)的基質(zhì)，強度高，易于化學(xué)修飾，但使用pH有限值(一般為2-8，特殊裝飾可達到1-12)。

聚合物基質(zhì):聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯，化學(xué)穩定，應用廣泛，pH范圍廣，疏水性強，蛋白質(zhì)等樣品分離效果好；但強度較小，有機溶劑可能導致聚合物膨脹和損傷，批次重復性差，商業(yè)色譜柱不多，一般價(jià)格較高。

荷載量：基質(zhì)表面鍵合相的比例，荷載量高，保留增加，適合分析非極性化合物。

鍵合相:不同的鍵合試劑對化合物有不同的選擇，一般長(cháng)鏈的烷基鍵合相不同。(C18.C8)比短鏈的(C4.C3)穩定性；與極性鍵合相比，非極性鍵合相(-NH2)穩定。

密封端：用短鏈關(guān)閉暴露的硅羥基鍵，減少殘留的硅醇基，減少因組分和酸性硅羥基反應引起的色譜峰尾現象。特別是對于極性樣品，未密封的色譜柱分離效果較差。

原則三：看正相，反相色譜

目前市場(chǎng)主要以反相色譜為主，約占80%。在了解了色譜柱的基本知識之后，色譜柱的選擇就解決了

原則四：根據柱長(cháng)和內徑選擇

長(cháng)度選擇：柱越長(cháng)，柱效越高(n值越大，柱越長(cháng)，分析時(shí)間越長(cháng)。250-300mm這是最常見(jiàn)的柱長(cháng)。超過(guò)一半的實(shí)驗室工作使用這種規格的柱子，通常用于分離l中等到復雜混合物從0到50組分；500-600mm，需要較高分辨率的應用程序，通常用于分離超過(guò)50個(gè)組件或復雜樣品，其中含有難以分離的物質(zhì)。

內徑：立柱效率與立柱半徑的平方成反比。內徑越小，立柱效率越高，但內徑越大，立柱容量也越大，允許的樣本量越多。當樣品輸入量超過(guò)立柱容量時(shí)，由于立柱中的每個(gè)理論板無(wú)法建立真正的平衡，會(huì )導致色譜蜂畸變，降低立柱分辨率，重現性差。因此，對于復雜準確分離的復雜樣品，必須使用小內徑柱。另一方面，如果樣品中存在不同濃度的組分化合物，則必須使用內徑較大的柱來(lái)增加樣品容量。目前，實(shí)驗室中使用的最常見(jiàn)的柱內徑一般為4.6mm。

一般選擇原則：分析大分子量化合物，選擇大孔徑色譜柱；高分子量化合物pH為了提高峰型，延長(cháng)色譜柱的使用壽命，應選擇高封端或特殊封端的色譜柱。