液相色譜柱的活化操作是常見(jiàn)的C以18反相分析柱為例,甲醇或乙腈等有機溶劑通常在出廠(chǎng)時(shí)密封。隨著(zhù)時(shí)間的推移,色譜柱中的有機溶劑揮發(fā)緩慢,色譜柱中可能出現氣泡。因此,新購買(mǎi)的色譜柱在使用前通常需要激活。
下面是常見(jiàn)的4.6mmX150mm,5μm粒徑的C18反相分析柱為例:
1.在激活色譜柱之前,應使用相關(guān)試劑清洗液相系統的流路,以確保沒(méi)有污染物殘留。切換到密封柱試劑(通常為甲醇或乙腈),更換流路中的試劑。
2.停止泵,將分析柱的進(jìn)口與系統連接,去掉出口的堵頭,出口與系統不連接。將色譜柱傾斜放置,使其出口高于進(jìn)口。
3.以0.1ml/min沖洗色譜柱的流速約為5分鐘,切換到0.2ml/min繼續沖洗流速。觀(guān)察色譜柱出液口,如果連續出液,停止泵,將色譜柱出液口連接到液相系統。
4.以0.1ml/min流速沖洗色譜柱,5分鐘內將流速穩定提升至0.5ml/min繼續沖洗色譜柱。
5.以0.5ml/min在沖洗色譜柱的過(guò)程中,觀(guān)察壓力和基線(xiàn)是否穩定,直至沖洗總流量達到30柱體積。
6.完成活化。
對于長(cháng)期未使用的類(lèi)似型號色譜柱,也可參考上述步驟再次使用前進(jìn)行激活。