液相色譜柱使用方法及緩沖鹽使用不當影響

　　高效液相色譜柱的正確使用包含：加裝保護柱，過(guò)濾流動(dòng)相和樣品，凈化樣品，避免過(guò)高的柱壓，注意溫度和酸堿度，正確及時(shí)的沖洗等。

　　保護柱的作用是過(guò)濾掉來(lái)自流動(dòng)相和樣品的化學(xué)“拉圾”同時(shí)也可以有效除去流動(dòng)相和樣品中的不溶物，盡管現在的色譜儀在流動(dòng)相吸入口，進(jìn)樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1，2μm等不同孔徑的濾器，但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污染，因此，加裝保護柱是必要的，特別是在分析中藥色譜柱，中成藥等復雜混合物和生物樣品時(shí)更是保護分析柱必不可少的措施。

　　流動(dòng)相通常由水或緩沖溶液與有機溶劑混合而成，原則上，所有經(jīng)過(guò)色譜柱的流動(dòng)相均應過(guò)濾，但在實(shí)際操作上應視具體情況而有所區別:當有機溶劑用色譜純級，水用石英亞沸水或其它超純水時(shí)，在能確保水和有機溶劑的質(zhì)量且沒(méi)有受到污染時(shí)，過(guò)濾并無(wú)更多實(shí)際意義。

　　當樣品中含有對色譜柱有損害的化學(xué)成分，如產(chǎn)生永久性吸附的蛋白質(zhì)，糖等有機分子和強吸附性物色譜柱質(zhì)，以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團離子，在進(jìn)樣前應盡可能對樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。

　　在液相色譜分析過(guò)程中，常常需要使用緩沖鹽來(lái)調解流動(dòng)相的pH值，緩沖鹽的恰當選擇能夠改善分離效果和峰形，若是對緩沖鹽選擇和使用不當，對色譜柱可能造成一些影響。

　　緩沖鹽使用不當對色譜柱的影響及其正確使用方法。

　　我們可以從柱壓升高，柱效下降以及使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化等方面來(lái)分析原因：。

　　色譜柱（1）柱壓升高。

　　原因：緩沖鹽使用不當導致緩沖鹽析出，會(huì )堵塞色譜柱兩端的塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙，阻礙流動(dòng)相傳質(zhì)，從而引起柱壓升高。

　?。?）柱效下降。

　　原因：a）有些緩沖鹽會(huì )滲入到鍵合相的深處，損害硅膠基體，導致色譜柱鍵合相流失，柱床變松，柱效下降，b）凝結在鍵合相表面，使C18碳鏈難以舒展，對物質(zhì)的保留能力下降，導致柱效下降，因此用過(guò)緩沖鹽后需要對色譜柱進(jìn)行沖洗，水中緩沖鹽濃度較大時(shí)應特別引起注意。

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