液相色譜柱簡(jiǎn)介和柱長(cháng)及內徑的選擇

　　色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟，對色譜柱的要求是柱效高，選擇性好，分析速度快等，市售的用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相，氧化鋁，有機聚合物微球（包括離子交換樹(shù)脂），多孔碳等，其粒度一般為3，5，7，10um等，柱效理論值可達5～16萬(wàn)／米。

　　對于一般的分析只需5000塔板數的柱效，對于同系物分析，只要500即可，對于較難的分離物質(zhì)對則可采用高達2萬(wàn)的柱子，因此一般色譜柱10～30cm左右的柱長(cháng)就能滿(mǎn)足復雜混合物分析的需要。

　　柱效受柱內外因素影響，為使色譜柱達到最佳效率，除柱外死體積要小外，也要有合理的柱結構（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術(shù)。

　　即使最好的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應，這種管壁區大約是從管壁向內算起30倍料徑的厚度，在一般的液相色譜系統中，柱外效應對柱效的影響色譜柱遠遠大于管壁效應。

　　柱長(cháng)及內徑的選擇：。

　　長(cháng)度的選擇：柱越長(cháng)，總柱效越高(n值越大)，柱越長(cháng)，分析時(shí)間也越長(cháng)，250—300mm是最普遍的柱長(cháng)，實(shí)驗室一半以上的工作都是采用此規格柱子，一般用來(lái)分離l0到50個(gè)組份的中等至復雜混合物，500—600mm，要求較高分辨率的應用，—般用來(lái)分離大于50個(gè)組份或包含有難分離物質(zhì)的復雜樣品程序升溫分析。

　　內徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內徑越小柱效越高，但內徑越大，柱容量也增加，允許進(jìn)樣量就越多，色譜柱當進(jìn)樣量超過(guò)柱容量時(shí)，則因柱內每塊理論板內不能建立真正的平衡，將會(huì )導致色譜蜂畸變，柱分辨率降低，重現性不好，因此對于復雜樣品需要精確分離，必須使用小內徑柱子，另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就必須使用內徑大的柱子，目前實(shí)驗室使用最常見(jiàn)的柱子內徑一般是4.6mm。

　　一般選擇原則：分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱，對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長(cháng)色譜柱使用壽命等。

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