色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。
1、硅膠純度:硅膠純度和殘留金屬離子濃度,硅膠的雜質(zhì)會(huì )影響化合物的峰形,硅膠表面的金屬含量高會(huì )影響堿性化合物的峰形,易發(fā)生拖尾。
2、色譜柱尺寸填料床的長(cháng)度和內徑,增加色譜柱長(cháng)度,可以在一定程度上提高柱效,但也會(huì )升高壓力和導致峰展寬;寬柱徑,提高載樣量,但也會(huì )增加橫向擴散,同樣會(huì )導致峰展寬。窄柱徑可以節約溶劑,可減少橫向擴散,但壓力較大,對系統要求較高。
3、顆粒形狀及粒徑球形顆粒柱效高、重現性好、柱床結構均勻,不規則形柱床結構不均勻、流動(dòng)相線(xiàn)速度不均勻,容易譜帶展寬;平均顆粒直徑,粒徑越小,柱效越高,柱壓也越高。粒徑分布越廣則柱效越低,壓力越大。
4、顆粒表面積:顆粒外表面和內部孔表面的總和,以m2/g表示,相對而言高表面積對樣品具有較強的保留能力,更大的柱容量和分離度。而低表面積能更快達到平衡狀態(tài),更適合梯度洗脫程序。
5、孔徑:顆粒的孔或腔的平均尺寸,范圍是80~300?,大孔徑的填料顆??梢匝娱L(cháng)大分子溶質(zhì)在填料表面的滯留時(shí)間,改善分離,所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動(dòng)力體積較大的分子。